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酶标检测仪检测饲料中三聚氰胺残留的方法
作者：admin 时间：2021-05-19 02:00:42 点击次数:5043
酶联吸附法测定三聚氰胺残留量的方法。用提取液将样品中三聚氰胺均质振荡提取**。首先将三聚氰胺酶标记物、样品提取液和标准品加入涂有三聚氰胺抗体的微孔开始反应。在30分钟的孵育过程中，样品提取液中的三聚氰胺与三聚氰胺酶标记物竞争，与微孔中的三聚氰胺抗体结合。孵育30分钟后，微孔中所有未结合的三聚氰胺和三聚氰胺酶标记物都被冲洗掉。用去离子水洗涤后，在每孔中加入一种清晰的底物溶液，结合酶标记将无色底物转化为蓝色物质。孵育30分钟后停止反应，根据各孔颜色读取数据。根据标准颜色，得到样品中三聚氰胺的浓度值。
一、酶标检测仪检测饲料中三聚氰胺所需的材料:
1. 蒸馏水或去离子水
2. 可以吸收50ul和100ul的移液器和吸头
3.4000转离心
4. 吸水性纸或同等的吸水性材料
5. 450海里标
6. 计时器
7. 20mM PBS:自备
8. 清洗液:需自备
二、酶标检测仪检测饲料中的三聚氰胺试剂配制：
1、20mM PBS： 0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl，蒸馏水定容至1000ml
2、清 洗 液： 0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl，蒸馏水定容至1000ml.+0.5ml 土温20
三、酶标检测仪检测饲料中的三聚氰胺样品的前处理： 饲料（稀释倍数：20）
1、称1g饲料样品，加入4ml甲醇；
2、震荡1min，加入0.1g氯化钠；
3、4000转离心5min；
4、取上清液0.2ml加入到0.8ml的20mMPBS中，混匀；
5、取150ul测定。
四、酶标检测仪检测饲料中三聚氰胺的过程:
1. 将所有试剂和样品放回室温20-28℃，但时间不要超过24小时;
2. 从铝箔袋中取出所需数量的微孔条，固定在微孔板架上，将未使用的微孔条与干燥剂一起放入密封袋中存放;
3.用吸管将150ul标准品和样品吸入相应的微孔。确保每一种溶液都是用干净的吸管来绘制的，以避免交叉污染。加入
每孔加入50ul三聚氰胺酶标记物;
4. 轻轻摇动盘子60秒，20-28摄氏度孵育30分钟;
5. 将微孔中的溶液倒入水槽中，将清洗液填满微孔，摇匀丢弃，重复三次，共四次清洗盘子;
6. 清洗一次后，将溶液倒进孔中，然后翻转微孔板，在吸水纸上轻拍干燥;
7. 每个微孔加入100ul底物溶液;
8. 20-28℃孵育30分钟;
9. 每个微孔加入100ul停止液;
10. 用莱恩德酶标检测仪在450nm下读板
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