酶标仪(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)是一种常用的生物化学分析方法,用于检测和定量分析样品中特定物质的存在和浓度。下面是酶标仪的使用方法的一般步骤:
1. 准备样品和试剂:收集样品并进行必要的预处理,如稀释、提取、去除杂质等。同时准备好所需的试剂,包括酶标板、酶标抗体、底物、洗涤缓冲液等。
2. 酶标板涂层:将目标抗原或抗体溶液加入酶标板孔中,使其吸附在孔底,形成固相。通常需要将酶标板放置在4°C的冰箱中一定时间,使抗原或抗体充分与酶标板结合。
3. 孔洗涤:在每个孔中添加洗涤缓冲液,将其倒出,重复该步骤多次,以去除未结合的抗原或抗体,减少非特异性背景信号。
4. 样品加入:将样品加入酶标板的相应孔中,通常有标准曲线样品和待测样品。样品可以是血清、尿液、细胞上清等,可以通过稀释将其加入孔中。
乐发9 5. 反应孔孵育:将酶标板封闭,并将其放入恒温箱或酶标仪中孵育一定时间,使抗原或抗体与样品中的目标物质结合。
6. 洗涤:使用洗涤缓冲液洗涤酶标板,去除未结合的物质。
7. 酶标抗体加入:将酶标抗体溶液加入酶标板的相应孔中,使其与样品中的目标物质结合。
8. 反应孔孵育:将酶标板封闭,并将其放入恒温箱或酶标仪中孵育一定时间,使酶标抗体与目标物质结合。
乐发9 9. 洗涤:使用洗涤缓冲液洗涤酶标板,去除未结合的物质。
10. 底物加入:向每个孔中加入底物,底物